Autor: Porubský, M.; Řezníčková, E.; Křupková, S.; Kryštof, V.; Hlaváč, J.
Název práce v češtině: Vývoj fluorescenčních sond s duálním FRET pro detekci aktivity kaspázy 8 a 9 a jejich relativní kvantifikaci
Název práce v angličtině: Development of fluorescent dual-FRET probe for simultaneous detection of caspase-8 and caspase-9 activities and their relative quantification
Studentská publikace: ne
Klíčová slova v češtině: Fluorescence, Fluorescenční sondy, FRET, Proteázy, Kaspázy, Matematický model
Klíčová slova v angličtině: Fluorescence; Fluorescent probe; FRET; Proteases; Caspases; Mathematical model
Abstrakt česky: Byla syntetizována a optimalizována multi-FRET třífluoroforová sonda obsahující kumarin, fluorescein a rhodamin B se dvěma enzymaticky štěpitelnými linkery pro současnou detekci aktivity a relativní kvantifikaci dvou proteáz – kaspázy-8 a kaspázy-9. Sonda navržená jako poměrový jednoexcitační trojemisní systém vykazuje specifickou změnu intenzit fluorescence po enzymatickém štěpení jednotlivých linkerů v modelových směsích i v buněčném lyzátu. Aktivace kaspázy-8 a kaspázy-9 je zodpovědná za iniciaci vnější, respektive vnitřní apoptotické dráhy, a sonda byla navržena jako jediný chemický nástroj, který by mohl pomoci rozluštit mechanismus buněčné smrti indukované různými podněty. Hlavní výhodou této sondy je jednoduchost její přípravy konvenční organickou syntézou, snadná aplikace pro měření a vyhodnocení výsledků.
Abstrakt anglicky: A multi-FRET three-fluorophore probe containing coumarin, fluorescein and rhodamine B with two enzymati-cally cleavable linkers has been synthesized and optimized for the simultaneous activity detection and relative quantification of two proteases – caspase-8 and caspase-9. The probe designed as a ratiometric single-excitation triple-emission system shows specific change in fluorescence intensities upon enzymatic cleavage of individual linkers in model mixtures as well as in a cell lysate. The activation of caspase-8 and caspase-9 is responsible for initiation of extrinsic or intrinsic apoptotic pathway, respectively, and the probe was proposed as a single chemical tool which could help to decipher a mechanism of cell death induced by various stimuli. The main advantage of this probe is the simplicity of its preparation using conventional organic synthesis, easy application for measurement and evaluation of the results.
Jazyk v originále: Angličtina
Název časopisu: Bioorg. Chem.
Rok: 2022
Svazek (ročník): 129
Číslo časopisu v rámci uvedeného svazku: –
Strana od-do: 106151
Impact factor: 5.32
Q1: ne

ISSN časopisu: 0045-2068
Vydavatel: ACADEMIC PRESS INC ELSEVIER SCIENCE
Způsob financování: GAČR (19-23972S)
DOI: 10.1016/j.bioorg.2022.106151