Autor: Briestenská, K.; Šamšulová, V.; Poláková, M.; Mistríková, J.
Název práce v češtině: Stanovení antivirotické aktivity metodou MHV-68/LUC.
Název práce v angličtině: Recombinant luciferase-expressing murine gammaherpesvirus 68 as a tool for rapid antiviral screening
Studentská publikace: ne
Klíčová slova v češtině: MHV-68, antivirotické testování, luciferáza,chinoliny/chinolony
Klíčová slova v angličtině: MHV-68, antiviral screening, luciferase, quinolone/quinoline derivatives
Abstrakt česky: Cílem této studie bylo vyvinout rychlou a citlivou metodu pro testování antivirových sloučenin proti gammaherpes virům. Za tímto účelem byla připravena rekombinantní luciferáza MHV-68 (MHV-68 / LUC). Testování metody probíhalo na Vero buňkách v 96-jamkových destičkách. Citlivost MHV-68 / LUC na acyklovir (ACV) a ganciclovir (GCV) byla měřena optimalizovaným testem redukce aktivity luciferázy. Hodnoty 50% inhibiční koncentrace (IC50) pro ACV a GCV byly srovnatelné s hodnotami stanovenými konvenčním testem redukce plaků. Test snižování aktivity luciferázy tedy může účinně nahradit test snižování plaků. Velké výhody nového testu představují významné zkrácení doby testu a rychlé a objektivní měření testu. Aby se vyhodnotilo, zda test snižování aktivity luciferázy lze použít jako screeningový systém pro nová antivirotika, byly nově syntetizované deriváty chinolonů/ chinolinů testovány na jejich účinky na replikaci MHV-68 / LUC in vitro. Sloučenina 2-(1-(β-D-Xylopyranosyl)-1,2,3-triazol-4-yl)-3,4-dibenzyloxychinolin vykazovala významnou antivirovou aktivitu a její IC50 proti MHV-68 / LUC byla stanovena na 1,76 μg / ml. Tato sloučenina však nebyla vhodná pro testování in vivo kvůli svému nízkému indexu selektivity (SI = 11).
Abstrakt anglicky: Murine gammaherpesvirus 68 (MHV-68) provides a valuable tool to screen novel therapeutic strategies against oncogenic gammaherpesviruses. The development and characterization of antiviral agents usually depend on appropriate screening assays. The aim of this study was to develop rapid and sensitive method for testing antiviral compounds against gammaherpesviruses. For this purpose, a recombinant MHV-68 expressing firefly luciferase (MHV-68/LUC) was constructed. The conditions for MHV-68/LUC infection in Vero cells suitable for novel antiviral screening assay in 96-well plate format were then optimized. The sensitivity of MHV-68/LUC to acyclovir (ACV) and ganciclovir (GCV) was measured by the optimized luciferase activity reduction assay. The 50% inhibition concentration (IC50) values for ACV and GCV were comparable to those determined by conventional plaque reduction assay. Therefore, the luciferase activity reduction assay can efficiently replace the plaque reduction assay. The great advantages of novel assay are represented by the significant reduction in assay time and rapid and objective measurement of the assay. In order to evaluate whether the luciferase activity reduction assay could be used as a screening system for novel antivirals, newly synthesized quinolone/quinoline derivatives were tested for their effects on the replication of MHV-68/LUC in vitro. The compound 2-(1-(b-D-Xylopyranosyl)-1,2,3-triazol-4-yl)-3,4-dibenzyloxy-quinoline showed significant antiviral activity and its IC50 against MHV-68/LUC was estimated to be 1,76 μg/ml. However, this compound was not suitable for in vivo testing due to its narrow selectivity index (SI = 11).
Jazyk v originále: Anglický
Název časopisu: Acta virologica
Rok: 2019
Svazek (ročník): 63
Číslo časopisu v rámci uvedeného svazku: 4
Strana od-do: 439-449
Impact factor: 0.43
Q1: ne
ISSN časopisu: 0001-723X
Vydavatel: Institute of Virology
Způsob financování: IGA_PrF_2018_29
DOI: doi:10.4149/av_2019_411